Effects of cryoprotectants and low temperatures on hatching and abnormal embryo development of Prochilodus lineatus (Characiformes: Prochilodontidae)

This study evaluated the effect of the cryoprotectants and the low temperatures on the embryonic development of Prochilodus lineatus, describing their main morphological alterations. On chilling sensitivity test, the survival rates at the twenty somites stage (20S) were 53.6% at 0ºC, and 100% in 5ºC. To test toxicity, the embryos were exposed to a graded series of 1,2-Propanediol (PROP), dimethyl sulfoxide (Me2SO4) and glycerol (GLY), terminating in a solution of high osmolarity. There was no significant difference in the embryos survival of toxicity test between series of PROP and Me2SO4 in the 6S and 20S. In the cooling protocols, were evaluated the effects of low temperature associated with cryoprotectants. At 5ºC, PROP showed survival rates above 75% in the gastrula stage (G) and above 90% in the 6S and 20S stages. High rates of abnormalities were observed, and the most recurrent were: small bodies, fins presenting uncontrolled cell growth, membrane rupture, and retraction. These results demonstrate the need to use cryoprotectant solutions, even when there is no ice nucleation, and, on the other hand, shows that high cryoprotectant concentrations promote numerous morphological lesions, compromising normal embryonic development.(AU)

Este estudo avaliou os efeitos dos crioprotetores e das baixas temperaturas no desenvolvimento embrionário de Prochilodus lineatus, descrevendo suas principais alterações morfológicas. Nos testes de sensibilidade ao frio, as taxas de sobrevivência, no estágio de vinte somitos (20S), foram de 53,6% a 0ºC e 100% a 5ºC. Nos testes de toxicidade, os embriões foram expostos a uma série graduada dos crioprotetores: 1,2-Propanediol (PROP), dimetilsulfóxido (Me2SO4) e glicerol (GLY), terminando em uma combinação de alta osmolaridade. Não houve diferença significativa na sobrevivência dos embriões nas séries do PROP e Me2SO4 nos estágios de 6S e 20S. Nos protocolos de resfriamento, foram avaliados os efeitos da baixa temperatura associados as séries crioprotetoras. A 5ºC, o PROP apresentou taxas de sobrevivência acima de 75% no estádio de gástrula (G) e acima de 90% nos estádios 6S e 20S. Foram observadas altas taxas de anormalidades sendo as mais recorrentes: corpos pequenos, nadadeiras apresentando crescimento celular descontrolado, ruptura da membrana e retração vitelínica. Estes resultados demonstram a necessidade do uso das soluções crioprotetoras, mesmo não havendo nucleação de gelo e, em contrapartida, demonstra que as elevadas concentrações crioprotetoras promovem numerosas lesões morfológicas, comprometendo o desenvolvimento embrionário.(AU)

Efecto de la concentración de crioprotectores sobre la viabilidad post vitrificación de embriones murinos (mus musculus) / Effect of cryoprotectant concentration on the post vitrification morphological viability of murine embryos (mus musculus)

Con la finalidad de determinar la mejor solución de vitrificación (SV), usando Etilenglicol (EG), Glicerol (G) y Sucrosa (SUC), se evaluó la apariencia morfológica post vitrificación de embriones murinos (Mus musculus). Ocho mezclas diferentes de crioprotectores fueron evaluadas, con las siguientes concentraciones: SV1: 0% de crioprotectores; SV2: 50% EG; SV3: 50% G; SV4: 50% SUC; SV5: 25% EG + 25% G; SV6: 50% EG + 0,3M SUC; SV7: 50% G + 0.3M SUC y SV8: 25% EG + 25% G + 0,3M SUC. El mayor número de embriones (94,7%) con apariencia morfológica normal, fueron los equilibrados con SV5. No hubo diferencia significativa entre la SV8 (88,9%) y la SV5. Mientras que los embriones criopreservados con las soluciones restantes, presentaron viabilidad morfológica más baja (p<0,05). Estos resultados sugieren que la SV5 provee mejor tolerancia al proceso de vitrificación, observándose en los embriones la más alta viabilidad y la más baja frecuencia de anormalidades morfológicas. Estos hallazgos contribuyen de manera importante, en la selección de los crioprotectores para la vitrificación.

In order to determine the best vitrification solution (VS), using ethylene glycol (EG), glycerol (G) and sucrose (SUC), the post vitrification morphology in murine embryos (Mus musculus) was evaluated. Eight different mixtures of these chemicals, with the following concentrations: VS1: 0%; VS2: 50% EG; VS3: 50% G; VS4: 50% SUC; VS5: 25% EG + 25% G; VS6: 50% EG + 0.3M SUC; VS7: 50% G + 0.3M SUC and SV8: 25% EG + 25% G + 0.3M SUC, were used. VS5 was the solution with the highest percentage (94,7%) of embryos with normal morphology. There were no significant differences between the VS8 (88.9%) and VS5. However, embryos cryopreserved with the other solutions had a lower morphological viability (p<0.05). These results suggest that VS5 provides embryos with better tolerance to the vitrification process, because a higher viability and lower frequency of morphological abnormalities were present. These findings provide details of great importance to the selection of cryoprotectants for vitrification.

Effect of prion protein extract on the morphology of chick embryos with special reference to the cerebellum

Prion disease is transmitted under natural conditions and involves a variety of mechanism through multiple routes. Prion protein peptides were generated according to amino acid sequences. To study the effect of prion protein extract on the embryo using egg as a model. Thirty chickens, one-day old from Arbor acre strain were used in this study and divided into three groups. The 1[st] group was fed on basal diets and served as a control. The 2[nd] and 3[rd] groups were fed on hyperproteinized diets which contained 50% and 80% concentrates respectively. After four months of feeding, brain, spleen, heart and lung were obtained for the isolation and purification of prion protein [PrP]. The result of SDS-PAGE gel electrophoretic separation of the PrP showed that, all organs contained a major band around 29 - 30 kdt. But purification of the PrP indicated that, the only fraction contained one band in the lung, two bands in the spleen and heart and four bands in the brain. In addition, the normal sequence of isolated PrP was contained 209 amino acids. Chicken fertilized eggs from Arbor acre strain were used in this study and divided into five groups. Group A was a control group. Groups B, C, D, and E that injected with 50 micro L PrP extracted from brain, spleen, heart and lung, respectively of the adult chicken fed on diets containing 80% protein for four months. The eggs were incubated at 37.8°C for 22 days and the injection was performed in the albumin on the 1[st] day of incubation. The eggs were opened on days 3, 5, 7, 9, 11, 15 and 21. Embryos were collected for the morphological examination. On day 15 of incubation, the eggs were opened and the cerebellum was processed for light microscopic study. Indicated that, PrP caused delay in hatching, decreased body weight and reduced body length. The percentages of malformations in embryos were 31.5, 25, 23 and 37% post injection with PrP extracted from brain, spleen, heart and lung respectively. The congenital malformations were malformed eyes, twisting legs, syndactylia and unformed abdominal wall. Cerebellar sections of chick embryos from injected eggs with any source of tissue PrP extracts showed vacuolar degeneration of cerebellar layers. Purkinje cells lost their normal flask-shaped appearance with eccentric nuclei. It was concluded that, a single injection of PrP which was extracted from hyperproteinized fed chicken caused congenital anomalies as well as histopathological changes independent on the source of tissue PrP

Teratogenic effects of adriamycin on the prenatal development of the vertebral column of the albino rat

Adriamycin [cytotoxic, antineoplastic antibiotic] and its metabolites had been implicated as human teratogens. Teratogenic studies had shown multiple congenital defects in rats exposed prenatally to adriamycin including esophageal atresia, multiple intestinal atresias, hydronephrosis and retarded bone ossification and formation of accessory ribs. Forty litters were used in this study for both control and experimental groups [20 for each] in the present study. Their mothers received 3 intra peritoneal injections [each of 1.75 mg/kg] in the 6[th], 7[th] and 8[th] days of gestation. On the 21[st] day of gestation all pregnant animals were sacrificed and their fetuses were obtained through laparotomy and uterine incisions. One half of the litters of both control and experimental groups were used for gross skeletal study using alizarin red stain and the other half was subjected for light microscopic study using ordinary paraffin section preparation technique. Morphometric measurements were applied to study variations of the total body weight, the CRL of the litters, the vertical and antro-posterior diameters of the vertebral bodies and the disc space and vertical diameter of the nucleus pulposus of the intervertebral discs. Multiple vertebral defects in the form of delayed or absent ossification features in the vertebral bodies, delayed or fusion between the bodies and neural arches, abnormal fusion between vertebral bodies, non visualization of most caudal vertebrae and significant decreased morphometric measurements of the experimental animals were observed in the present work. These abnormalities as well as features of intrauterine growth retardation caused by adriamycin that is considered as an antimitotic agent causing delayed differentiation and growth by interfering with cell division

Mecanismo embrionário das malformações decorrentes de fármacos / Embrional mechanisms of malformations current of pharmacs

As malformações congênitas decorrentes de teratógenos atingem um ou mais folhetos, ou camadas germinativas, do embrião, originando alterações em sistemas orgânicos, entre os quais os mais atingidos são o cardiovascular, o osteolocomotor e o nervoso. Os tecidos interagem reciprocamente, ora induzindo, ora sendo induzido, através de mecanismos moleculares controlados por genes específicos da família sonic hedgehog, presentes nas células embrionárias em proliferação, onde o mesoderma intra-embrionário é o folheto-chave nestas induções. Neste trabalho, mais uma vez os autores chamam a atenção para a necessidade da prevenção primária das malformações congênitas, inclusive a análise do custo-benéficio em se administrar drogas às gestantes, sobretudo na saúde pública preventiva, no sentido de evitar que as malformações aconteçam

The usefulness of autopsies as a tool for teaching human embrilogy

Embryology is often difficult to teach because of the rapid, three-dimensional changes that occur simultaneously on a microscopic scale. A knowledge of normal and abnormal human development is important for understanding the pathophysiology, clinical treatment and surgical repair of malformations. In this study, we developed a method to enhance the comprehension of human embryology and its associated malformations. The strategy used macro-and-microscopical digital documentation of embryos, fetuses and neonates undergoing autopsy in the Department of Anatomical Pathology at the State University of Campinas. The images acquired were used in the Human Morpho-Physiology, course of the university´s medical curriculum. The embryology lectures were divided into two parts. In the first part, the development of the body´s structures was explained, while in the second, macro-and-microscopic images of selected autopsies were shown to the students, who were also encouraged to find and discuss the malformations and their clinical history, diagnosis and therapeutics. At the end of the course, the teaching material and the method used were evaluated using a questionnaire, interviews, and a test of the knowledge acquired during the lectures. Most of the students approved the method, and emphasized the importance of integration between basic and clinical disciplines. Their performance in the examination was also good

Farmacoterapia en el embarazo y la lactancia / Drug therapy in pregnancy and breastfeeding

La prescripción de medicamentos y la automedicación de la mujer embarazada es un hecho conocido. En este articulo se analizan los cambios fisiológicos y farmacocinéticos que supone el embarazo y que pueden alterar los resultados de la medicación. Se analiza el rol de la placenta a la que ya no se la considera como una "barrera", sino como una vía de llegada de oxígeno, nutrientes y fármacos. Se define teratogénesis en sentido amplio y se describen los mecanismos más importantes de teratogenia. Se describen los períodos más críticos donde puede actuar un teratógeno. Se realiza un repaso crítico de la clasificación de la Food and Drug Administration (FDA). Por último se analizan algunos fármacos que deben ser usados con precauciones durante la lactancia y se dan una serie de normas de carácter general, tanto para la prescripción durante el embarazo, como durante la lactancia.

Interrupção legal em gestações com fetos portadores de patologias letais: aspectos epidemiológicos e emocionais / Legal abortion in pregnancies with lethal fetal abnormalities: epidemiological and emotional aspects

Analisar aspectos epidemiológicos e emocionais nos casos de interrupção legal de gestações de fetos portadores de malformações incompatíveis com sobrevida neonatal, atendidos no Programa de Medicina Fetal (PMF) do Centro de Atenção Integral à Saúde da Mulher (CAISM) - UNICAMP entre 1995 e 1999; investigar as gestações levadas a termo nas mesmas circunstâncias. Estudo retrospectivo e documental a partir dos prontuários de 153 gestantes atendidas no PMF com diagnóstico pré-natal de anomalias fetais incompatíveis com a vida. Variáveis estudadas: idade, estado civil, idade gestacinal (IG) de admissão, antecedentes gestacionais, planejamento da atual gestação, patologia fetal. Setenta pacientes (45,7 por cento) optaram pela interrupção da gravidez (grupo A) e 83 (54,3 por cento) pela continuidade (grupo B). Distribuição dos tipos de anomalia diagnosticados; anencefalia (43,2 por cento), patologia renal (22,2 por cento), malformações múltiplas (7,2 por cento), trissomia do cromossomo 18 (11,7 por cento), trissomia do cromossomo 13 (5,9 por cento), displasias esqueléticas (6,5 por cento) e gemelidade incompleta (3,2 por cento). Faixa etária das pacientes: 16 a 43 anos. A freqüência de primigestas e multíparas foram semelhantes. As interrupções autorizadas ocorreram entre o 2º e o 3º trimestre gestacional. A IG e o tipo de patologia fetal foram significativamente determinantes na opção (p=0,03 e p<0,001, respectivamente). Importância do diagnóstico precoce de malformações. A possibilidade de interrupção pode representar um fator tranqüilizador.

Prevençäo de malformações congênitas / Congenital malformations prevention

A idéia de escrever este artigo surgiu a partir da experiência didática, durante os últimos 22 anos, sobre temas referentes à embriologia geral (formaçäo do zigoto humano até o início do período embrionário) e embriologia especial (diferenciaçäo dos sistemas orgânicos), de um simpósio interno CAMU I - Unesa-2001 e, finalmente, da VIII Semana Científica da FMP, em 2002, sobre "Medicina: uma preocupaçäo com a saúde ou com a doença". Segundo a OMS (1999), o nível primário representa evitar que aconteça o modelo genético, o secundário representa evitar a recorrência das doenças entre as famílias e o terciário representa a reabilitaçäo dos problemas decorrentes destas doenças. A prevençäo das malformações congênitas, sobretudo, se faz mais essencial na saúde pública preventiva, ou seja, no nível primário, tendo como objetivo final proporcionar uma boa qualidade de vida ao portador da malformaçäo

Nosología actual de las duplicaciones embrionarias / Embryonic duplication. A nosologic update

Las formas anormales de gemelaridad constituyen un impactante fenómeno biológico y cuentan con una larga historia de concepciones erróneas, escaso conocimiento y una amplia y confusa sinonimia. En esta revisión se presenta la nosología actual de las duplicaciones embrionarias monocigóticas con énfasis en los gemelos unidos (GU), mediante la cual casi la totalidad de los casos de GU pueden ser adecuadamente diagnosticados. Dicha clasificación se basa en la orientación que guardan los discos embrionarios en etapas tempranas del desarrollo, resultando los 8 sitios de uniones conocidas tanto para las formas simétricas, parasitarias o ambas de GU: toracópagos, onfalópagos, cefalópagos, isquiópagos, parápagos, pigópagos, craneópagos y raquípagos. Además, se plantean las bases teóricas propuestas para el origen de las duplicaciones embrionarias, su epidemiología estimada a partir de alrededor de 1,300 reportes y su diagnóstico prenatal y diferencial. El entender la naturaleza aleatoria del fenómeno de gemelaridad, nos conduce a aceptar las limitaciones y avances en su tratamiento.

Fusión espleno-gonadal continua: reporte de un caso / Continuous splenic-gonadal fusion: case report

La fusión espleno-gonadal es una anomalia congénita rara. Es el resultado de la fusión de los esbozos esplénicos y gonadal durante el desarrollo embriológico. Se han descrito aproximadamente 90 casos en la literatura

Embriogénesis del sistema arterial coronario / Embryogenesis of coronary arterial system

La rapidez con la cual la circulación coronaria se establece durante el proceso embrionario es una de las características principales en el desarrollo cardiaco. Las arterias coronarias aparecen durante la transición entre la sexta y sétima semanas del desarrollo, como un brote angioblástico que una vez establecido se extiende rápidamente a través de la hoja epicárdica del corazón en formación. Presencia de vasos coronarios se logró comprobar con el estudio de doce embriones de seis, siete y ocho semanas, tratados con hematoxilina-eosina y cortados seriada, transversal y longitudinalmente, en los cuales se buscó la presencia de vasos coronarios en las regiones correspondientes a los surcos atrioventricular e interventricular hasta el ápex; así como en la desembocadura de la vena cava superior y los bordes agudo y obtuso. Pudiéndose concluir que para la novena semana, toda las ramas mayores de las arterias coronarias caraterísticas del corazón adulto, está prácticamente representadas

Influência da radiaçäo ionizante (bomba de cobalto) em embriöes de coelha na fase de pré-implantaçäo: influência no índice mitótico e malformaçöes no pólo embrionário / Influence of ionizing radiation (CO60) in pre-implant rabbit embryos: influence on mitotic index and embryonic pole malformations

Neste estudo avaliou-se o efeito da radiaçao ionizante em 12 coelhas (65 embrioes), em três diferentes momentos da gravidez: no momento do cruzamento / ovulaçao (hora zero), dois dias após e quatro dias após, com duas diferentes doses de irradiaçao: 5 cGy e 1O cGy. Seis coelhas (36 blastocistos) foram usadas como controles. O momento do cruzamento foi considerado a hora "zero". Após seis dias (ñ 60 minutos), os embrioes de cada coelha foram obtidos por lavagem do útero com meio de cultura. Os embrioes foram fixados em metanol por 48 horas, e corados com hematoxilina ácida de Mayer. Os seguintes parâmetros foram estudados: a - índice mitótico; b - malformaçoes do pólo embrionário. Nao se encontrou malformaçoes grosseiras do pólo embrionário. O índice mitótico foi alterado tanto pelo momento quanto pela dose irradiada.